【產品包裝與價格】

產品類別		目錄號	規格	價格	描述
DNA	Pulldown-LM	SINP120	10次 20次	2390元 3346元	用于直接與間接DNA Pulldown，用解離液直接做質譜的實驗。操作說明隨Kit發貨。
	Pulldown-WB	SINP121	10次 20次	2856元 3998元	用于直接與間接DNA Pulldown，用WB鑒定下拉蛋白的實驗。操作說明隨試劑發貨。
	Pulldwon-GM	SINP122	10次 20次	3569元 4997元	適用于直接與間接DNA Pulldown，通過切Page膠染色帶做質譜的實驗。操作說明隨試劑發貨。
RNA	Pulldown-LM	SINP130	10次 20次	2856元 3998元	用于直接與間接RNA Pulldown，用解離液直接做質譜的實驗。操作說明隨Kit發貨。
	Pulldown-WB	SINP131	10次 20次	3569元 4997元	用于直接與間接RNA Pulldown，用WB鑒定下拉蛋白的實驗。操作說明隨試劑發貨。
	Pulldown-GM	SINP132	10次 20次	4285元 5999元	用于直接與間接RNA Pulldown，通過切Page膠染色帶做質譜的實驗。操作說明隨試劑發貨。
注：1）訂貨信息須包括產品類別+目錄號+規格。例如訂20次RNA Pulldown WB檢測Kit的訂貨信息為；RNA Pulldown-WB，目錄#SINP132，規格20次。2）微奧基因還提供各種Pulldown 技術服務，以及個性化探針設計與定制服務（查看）。

【Pulldown Kits組分比較】

	DNA/RNA Pulldown*
	解離液質譜/Pulldown-LM		WB鑒定/Pulldown-WB		PAGE帶質譜/Pulldown-QM
	直接	間接	直接	間接	直接	間接
Pulldown探針*	－	－	－	－	－	－
雜交反應液**	－	option	－	option	－	option
游離探針清除柱**	－	option	－	option	－	option
雜交反應洗液**	－	option	－	option	－	option
核酸蛋白結合液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
親和素磁珠	＋	＋	＋	＋	＋	＋
反應促進劑	＋	＋	＋	＋	＋	＋
背景抑制劑	＋	＋	＋	＋	＋	＋
核酸蛋白洗液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
結合解離液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
電泳預制膠	－	－	＋	＋	＋	＋
PAGE電泳液	－	－	＋	＋	＋	＋
高敏PAGE膠染液	－	－	－	－	＋	＋
PAGE膠脫色液	－	－	－	－	＋	＋
對照標記探針	option	option	option	option	option	option
質控蛋白與探針	option	option	option	option	option	option
電泳設備與試劑	－	－	客戶自備	客戶自備	客戶自備	客戶自備
轉運膜/轉運液	－	－	客戶自備	客戶自備	－	－
特異性抗體	－	－	客戶自備	客戶自備	－	－
測定樣品數	10/20	10/20	10/20	10/20	10/20	10/20
注：*Pulldown kits 本身不帶任何探針，微奧基因提供各種標記與非標記Pulldown探針的個性化探針的設計與制作服務。此外，微奧基因有多種已經標記并測試過的Pulldown探針，有需要的請與微奧基因客客服聯系。**間接法Pulldown所使用的標記探針與目標DNA/RNA雜交后，為提高檢測靈敏度，有必要清除未雜交的游離標記探針。微奧基因提供包括清除游離探針的Kit（包括雜交液、清除柱與洗液），有需要的，請與微奧基因客服聯系。

【產品特點】

1. 結合反應特異性高，非特異結合少。

2. SDS PAGE 染色帶清晰、銳利。

3. 染色靈敏度高，可以純化很少量的DNA結合蛋白（Pic. 3）。

4. Pulldown的蛋白適合質譜分析。

【適用范圍】

1. 鑒定未知DNA/RNA結合蛋白；在一些情況下（如 Circle-RNA、lncRNA等），可能并不知道與DNA/RNA結合的有哪些蛋白、是些什么蛋白。使用本試劑盒結合質譜分析能夠對未知結合蛋白進行鑒定， 不需要使用純化蛋白或抗體。

2. 鑒定DNA結合蛋白的組份；許多轉錄因子都是多種蛋白的多聚體。例如NFkB有P65， P52，P50，C-rel 和Rel-B 5種亞單位。活化的NFkB為相同或不同亞單位之間的二聚體，鑒定NFkB的亞單位常用Supershift （超遷移）EMSA， 需要使用針對各種NFkB亞單位的抗體，價格不菲。使用試劑盒可以NFkB亞單位代替Supershift EMSA 對DNA-蛋白復合物的亞單位進行鑒定，不需使用任何抗體。

3. 鑒定DNA結合蛋白與其它蛋白的相互作用 ；一些轉錄因子與DNA的結合還需要一些不與DNA結合蛋白的參與。使用本產品能夠同時對DNA結合蛋白與非DNA結合蛋白進行鑒定。

【注意事項】

1. 本試劑能夠與Viagene的EMSA成套試劑無縫銜接。但如果使用Thermo， Signosis或碧云天的EMSA試劑，可能達不到理想效果或導致完全失敗。其原因是因為不同廠家所用的結合反應液成分不同，不同反應液對同一種轉錄因子的 測定會有明顯差異（Pic. 4）。

2. 使用本產品前，建議先進行常規EMSA測定。EMSA測定可以提供以下信息；

1）有沒有在EMSA測定中看到DNA與蛋白的結合帶。明顯的EMSA結合帶預示好的鑒定結果。

2）EMSA結合帶的強弱提示Pulldown的反應體積；結合帶強、樣品核蛋白用量少，反應體系體積小。

3）如果EMSA測定中非特異條帶明顯，需要使用相同細胞株的陰性對照來確定純化后的非特異帶譜。

3. 請嚴格按照操作手冊進行操作。如果遇到問題，請用生物素標記質控探針與核蛋白樣品進行Pulldown 實驗。生物素標記質控探針所測定的DNA結合蛋白存在于幾乎所有細胞核中，Pulldown的上清液在用考馬斯亮藍染色的PAGE膠中，應會看到為蛋白帶。陰性結果提示 1）樣品中核蛋白降解核蛋白，2）用于pulldown的核蛋白總量不夠，3）樣品中的核蛋白濃度太稀，4）核蛋白在提取過程中丟失，提示需要重新制作核蛋白樣品并做結 合蛋白的EMSA鑒定。

 

 

 

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  Pic. 3, 20ul、10ul、5ul、2.5 ul、1.25ul 細胞裂解液重復加入SDS PAGE膠。電泳后，凝膠板切成左右兩片，分別用微奧基因與Thermo的考馬斯亮藍（CBB）染色。Pic. 4, 用鏈親和素磁珠Pulldwon 的DNA結合蛋白（電泳道1-5用微奧基因 CBB染色）：1)從EMSA陽性的樣品pulldown的蛋白，泳道2使用與泳道1相同細胞樣品，但細胞未經過激活處理。泳道3與4，為NFkB EMSA 陽性與陰性樣品的pulldown結果。結合質譜分析，能夠鑒定NFkB的亞單位。5，蛋白分子Marker。6與7，樣品與操作與泳道3與4相同。Pulldown蛋白經SDS-PAGE分析，用碧*天CBB染色。