傳統(tǒng)用放射性同位素標(biāo)記探針的EMSA需要5到6天出結(jié)果，天天都要與射線打交道。基于地高辛標(biāo)記的非放射性EMSA需要3天左右出結(jié)果。

微奧基因的生物素標(biāo)記探針的EMSA測定（濕轉(zhuǎn)膜，查看）可在8小時左右出結(jié)果。以后再經(jīng)過我們科學(xué)家改進，生物素標(biāo)記探針的EMSA（半干轉(zhuǎn)膜，查看）可在4個時左右完成。我公司最新成果使EMSA測定能在2小時左右完成，不僅快，關(guān)鍵是操作非常簡單（查看比較幾種不同EMSA方法），使之成為遠比Western Blot測定磷酸化信號分子或免疫熒光更為簡便有效的測定TF的技術(shù)。

A.  2小時EMSA的工作原理：

快遞EMSA是通過近紅熒為分子標(biāo)記探針完成的，工作原理非常簡單：熒光標(biāo)記探針與轉(zhuǎn)錄因子相比分子量相對很小，在電泳中移動快。而熒光探針與轉(zhuǎn)錄團子結(jié)合的復(fù)合物分子量增加10倍以上，電泳移動慢。近紅熒光探針在凝膠板中的位置可通過掃描儀確定。

B.  2小時EMSA的優(yōu)點：

1) 非放射性。

2) 試劑在適當(dāng)溫度可保持一年以上，隨時取用。

3) 操作十分簡單，整個操作只相當(dāng)于跑一次垂直板凝膠電泳。

4) 大概2小時出結(jié)果。

5) 適合定量分析。

6) RNA EMSA測定的首選方法。

由于以上顯著優(yōu)點，是否EMSA測定方法（同位素法，生物素法以及地高辛法）就應(yīng)該淘汰呢？答案是否定的，主要有以下限制與問題存在：

C.  2小時EMSA的問題：

1）設(shè)備問題。采用熒光標(biāo)記探針的非放射性EMSA一直有人試，但無法解決靈敏度低的問題。Licor公司開發(fā)的近紅外熒光技術(shù)與相應(yīng)儀器輝快了長期困擾的靈敏度問題。但Licor公司的近紅外掃描儀（Odyssey）需要20多萬一臺。如果沒有Odyssey，用戶愿意為了做EMSA購買一臺嗎？一般來講，近紅外標(biāo)記探針的EMSA比較適合已經(jīng)有Odyssey近紅外掃描儀的大學(xué)與科研院所。

2）探針問題。在已經(jīng)有Odyssey近紅外掃描儀的單位進行近紅熒光標(biāo)記的EMSA還是有相當(dāng)困難。一是在國內(nèi)沒有任何一家應(yīng)用LiCor公司的lRDye700/800進行核酸探針的公司。即使使用替代近紅外熒光（如CY5.5等）來標(biāo)記探針，國內(nèi)外的價格較生物素標(biāo)記貴近4-5倍。例如，5 OD的探針，DNA合成公司對生物素標(biāo)記的收費為300－500元/鏈，地高辛標(biāo)記400－600元/鏈。而用CY5.5標(biāo)記DNA鏈的價格為1500－2000元/鏈（生工網(wǎng)上顯示收費1500元，寶生物為2200元）。因為EMSA探針為雙鏈，實際合成探針的費用還要X2，再加上合成Olig的費用。僅僅合成帶近紅熒光寡核苷酸的費用就在4000元左右，還不包括后面雙鏈制作，純化以及比活性測定。這樣的費用使一些用戶望而卻步，寧可采用相對較便宜的生物素（化學(xué)發(fā)光）標(biāo)記探針的EMSA。

3）由于近紅外熒光標(biāo)記物的松散的化學(xué)結(jié)構(gòu)（比較結(jié)構(gòu)的差別）。標(biāo)記的探針很容易產(chǎn)生聚積而不進膠，使結(jié)合信號變?nèi)酢Ｔ趪猓胁簧儆脩糇约汉铣山t外熒光探針但都因為探針聚積問題而放棄了。Li-Cor公司的解決方法是改用4-20％的梯度膠。即使這樣，NFKB的EMSA結(jié)果仍顯示在上樣孔有明顯的探針聚積（查看Li-Cor用4-12%凝膠電泳的NFkB圖譜）。

D.  Vingene所解決的技術(shù)難題：

1）發(fā)展了近紅外熒光探針標(biāo)記的新技術(shù)，使近紅外探針的價格大幅降低，到達與其它非放射性探針相近的價位。

2）比較好的解決了探針聚積問題，使結(jié)果更清晰、漂亮。

E.  2小時EMSA所需要的條件：

1）近紅外熒光標(biāo)記探針（微奧基因的成套試劑已包括，或選用微奧基因的探針定制服務(wù)）。

2）近紅外熒光探針與樣品反應(yīng)結(jié)合液（微奧基因的成套試劑已包括）。

3）樣品上樣液（微奧基因的成套試劑已包括）。

4）用于EMSA的預(yù)制凝膠板（微奧基因產(chǎn)品，選購項）。

5）Li Cor的近紅外熒光掃描儀或任何能夠?qū)?00nm熒光進行掃描儀器（客戶自備）。