一、產品簡介:

細胞核和細胞漿目前成為研究細胞組分的兩個熱點，獲得高濃度的細胞核蛋白和細胞漿蛋白成為得到好的研究結果的重要實驗過程。 本試劑盒主要原理是在低滲透壓條件下，使細胞充分膨脹，然后破壞細胞膜，釋放出細胞漿蛋白，離心得到細胞核沉淀。最后通過高鹽的細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。本試劑盒是本公司非放射性EMSA試劑盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004, SIDET006, SIDET007）實驗成功的重要部分，經BCA測定24cm2貼壁細胞（或50ml規格培養瓶養的懸浮細胞）抽提物，核蛋白濃度約為1.2－3.0ug/ul.。抽提得到的樣品為非變性的天然核蛋白可以用于EMSA，Footprinting，報告基因檢測以及酶活力測定，加SDS樣品液后可用于WB等分析。本試劑盒足夠進行50個樣品的核蛋白抽提。

二、細胞核蛋白抽提步驟：

1. 貼壁細胞胞漿蛋白—核蛋白制備：

（1）將50ml規格的細胞培養物（細胞生長面積約24cm2）置于冰盒上低溫操作。
（2）   棄培養瓶中上清培養液，加3ml 預冷1×PBS于細胞培養瓶中漂洗細胞3次。
（3）   取1.0ml胞漿蛋白裂解液I漂洗細胞一次，棄漂洗后的緩沖液。
（4）   取1.0ml胞漿蛋白裂解液II于培養瓶中溶解細胞，可用1.0ml移液槍貼壁吹打細胞多次,可以在顯微鏡下觀察細胞的裂解情況。
（5）    盡量吸干凈培養瓶中的裂解液，轉入1.5ml離心管中，4℃，14,000 rpm 離心5min。
（6）    用移液器分開上清和沉淀，上清液即為胞漿蛋白液，請于-80℃保存。
（7）    取0.5ml胞漿蛋白裂解液I漂洗沉淀一次，4℃，14,000 rpm 離心5min，棄上清。
（8）    取50ul 核裂解液（根據沉淀量可酌情增減）重懸沉淀，4℃，靜置離心管30min，并間隔劇烈震動重懸沉淀。同時調離心機冷卻至4℃。
（9）    4℃，14,000rpm 離心 20min。

2. 懸浮細胞胞漿蛋白—核蛋白制備：(查看相應說明書）