【核酸結合蛋白服務價格】

服務類別	目錄號	規格	價格	描述
DNA-Prot. Pulldwon	SERV031	批（4個起步）	-	為鑒定出特異性目標蛋白，Pulldown 實驗一般應包括不含結合蛋白的樣品、包含結合蛋白樣品，Pulldown前樣品對照、無標記探針的試劑對照。建議先做EMSA看有沒有結合帶。
RNA-Prot. Pulldwon	SERV032	批（4個起步）	-
注：微奧基因還提供DNA-protein與RNA-protein pulldown 成套試劑盒（查看）。

   

【核酸結合蛋白鑒定技術】

A. Pulldown 鑒定： Pulldown/Pull-down鑒定核酸結合蛋白的步驟如右圖所概括，大致步驟包括；

1. 制備與準備樣品（樣品由客戶提供，樣品必須含有與核酸探針特異性結合的蛋白）。

2. 制備與準備標記探針與試劑，由我公司技術組準備。

3. 樣品與標記探針進行結合反應。

4. 親和素磁珠與標記探針/蛋白復合物結合。

5. 在磁場下或通過離心使結合物與上清液分離。

6. 吸棄上清液并洗滌磁珠

7. 用SDS樣品液使結合蛋白變性而與核酸探針/磁珠分離。

8. 分離液中的蛋白質用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）或雙向電泳分離。

9. SDS PAGE膠用高靈敏度考馬斯亮藍（CBB）染色。

10. 對SDS PAGE膠進行脫色并攝像記錄。

11. 經與客戶協商后，從染色PAGE膠上切下所需蛋白帶進行質譜分析，確認蛋白種類與類型。

 

B. EMSA PAGE膠結合帶切膠分析

用Pulldown方法有時候會抓下來很多蛋白帶。太多蛋白帶會導致分析、比較困難。對于已經進行過EMSA測定，并看到明顯結合的情況，可以采用直接在EMSA PAGE膠上切核酸/蛋白 結合帶的方法，將切下的帶匯集后進行 SDS PAGE 電泳 或做質譜分析。本方法比較直接，難點是EMSA PAGE膠上的結合帶是用化學發光與熒光放大了的，其原始量在膠上是不可見的，操作十分困難。微奧基因 有專門技術與方法進行相關分析與鑒定。已經服務過不少客戶（見左上例圖）。