【核酸結合蛋白服務價格】
服務類別 | 目錄號 | 規格 | 價格 | 描述 |
---|---|---|---|---|
DNA-Prot. Pulldwon |
SERV031 |
批(4個起步) | - | 為鑒定出特異性目標蛋白,Pulldown 實驗一般應包括不含結合蛋白的樣品、包含結合蛋白樣品,Pulldown前樣品對照、無標記探針的試劑對照。建議先做EMSA看有沒有結合帶。 |
RNA-Prot. Pulldwon |
SERV032 |
批(4個起步) | - | |
注:微奧基因還提供DNA-protein與RNA-protein pulldown 成套試劑盒(查看)。 |
【核酸結合蛋白鑒定技術】
A. Pulldown 鑒定: Pulldown/Pull-down鑒定核酸結合蛋白的步驟如右圖所概括,大致步驟包括;
1. 制備與準備樣品(樣品由客戶提供,樣品必須含有與核酸探針特異性結合的蛋白)。
2. 制備與準備標記探針與試劑,由我公司技術組準備。
3. 樣品與標記探針進行結合反應。
4. 親和素磁珠與標記探針/蛋白復合物結合。
5. 在磁場下或通過離心使結合物與上清液分離。
6. 吸棄上清液并洗滌磁珠
7. 用SDS樣品液使結合蛋白變性而與核酸探針/磁珠分離。
8. 分離液中的蛋白質用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)或雙向電泳分離。
9. SDS PAGE膠用高靈敏度考馬斯亮藍(CBB)染色。
10. 對SDS PAGE膠進行脫色并攝像記錄。
11. 經與客戶協商后,從染色PAGE膠上切下所需蛋白帶進行質譜分析,確認蛋白種類與類型。
B. EMSA PAGE膠結合帶切膠分析
用Pulldown方法有時候會抓下來很多蛋白帶。太多蛋白帶會導致分析、比較困難。對于已經進行過EMSA測定,并看到明顯結合的情況,可以采用直接在EMSA
PAGE膠上切核酸/蛋白 結合帶的方法,將切下的帶匯集后進行 SDS PAGE 電泳
或做質譜分析。本方法比較直接,難點是EMSA
PAGE膠上的結合帶是用化學發光與熒光放大了的,其原始量在膠上是不可見的,操作十分困難。微奧基因
有專門技術與方法進行相關分析與鑒定。已經服務過不少客戶(見左上例圖)。