一,創業故事。
Viagene創業團隊的成員都曾經是科研一線的科學家與學科帶頭人,都是以前發表文章的共同作者。所有成員所發表的文章累計有數百篇,包括Nnturl,Cells,PNAS,Blood等,從事的領域集中在“細胞信號傳導”,“胚胎干細胞”與“iPSC”領域。
團隊之一的R.Y.
Liu主要負責中國的業務,創業前在美國南佛羅里達州立大學作教授,發表過幾十篇文章,許多文章的IF都在8以上,使用EMSA測技術的文章可追溯到22年前(查看)。比較重要的發現有二條,在HSE
EMSA測定中常見到一種負調節現象,利用固化探針的方法純化該蛋白,發現了一種新調節蛋白
Ku家族,導致了一篇Nature文章與數篇PNAS的文章。以后與Dr. Richard
Jove合作,用EMSA研究白血病STATS轉錄因子活性時,發現一些白血病細胞有持續活化的STAT5,應該算是最先報告該現象。進一步研究證明異常活化的STAT5與白血病存活有關,抑制該轉錄因子就會引起細胞死亡,為此在所在的美國大學申請了4項專利。
Dr. Richard Jove從事 Tyrese Kinase 的研究,是STAT3轉錄因子與相關信號通路的世界權威,有興趣的可以到 Pubmed 或 Google 學術查一下 關鍵詞
“Richard Jove”, STAT3",會有幾百篇文章出現。團隊的另一成員K.S.
Zuckerman是血液病(白血病)相關信號轉導的權威。在 Pubmed 或 Google 學術查關鍵詞
“Kenneth Zuckerman”同樣可以查到上百篇文章。
科研中時發生的一些事件,導致幾位科研合作伙伴走上了創業之路。
(1) 從事細胞信號傳導需要做很多WB,需要經常跑膠、沖洗感光膠片。由于做WB的人多,帶有膠片沖洗機的暗室只有一個,經常都要等候。盡管等一等不是問題,但膠片沖洗機常出毛病卻很要命。實驗從準備細胞,處理細胞,準備樣品,跑膠,轉運,孵育到顯圖需要1周左右,由于機器毛病不能出結果是很令人抓狂。每當這時,相信就會有人想到是否可以用數碼像機代替感光膠片呢?對于多數生物科學家,想想也就罷了,而我們的團隊卻有相應知識與能力做相應的開發嘗試。1998年前,成像儀包括Bio-Rad和Alpha Innotech的成像儀都只能用于照DNA圖,儀器暗箱不避光,不能用于化學發光。我們當時用膠合板做了一個完全避光的暗箱,采用了Cohu公司的致冷CCD與Scion公司的工業采集卡,做成了一個化學發光成像儀,效果非常不錯,該暗箱現在還能使用。
(2)
另一方面,研究細胞信號傳導需要做很多EMSA,幾乎天天與放射性同位素打交道。雖然創業團隊成員當時都已不做具體操作,但實驗操作員卻叫苦連天。在試驗臺數米遠,甚至實驗室門口就能用閃爍計測出很強聲響。當時就想過改用非同位素探針做EMSA,曾試過Roche公司的地高辛標記,但沒有成功。主要是用地高辛標記出來的探針的比活性達不到要求,后面的EMSA沒法做。也試過文獻報道的FITS與FAM標記探針的方法,但熒光探針靈敏度低,無法替代放射性探針。后來發生過一次大面積放射性污染導致實驗樓關閉兩周,使我們不得不認真考慮非放射性EMSA。幾個月后,終于把用生物素標記探針的EMSA做到能看到帶譜,但存在信號弱以及與放射性EMSA圖不一致的問題,當時百思不得其解,幾個月后才發現是非放射性探針引起的問題。期間Pierce公司上市了基于化學發光的的EMSA試劑(Light-
Shift)。由于Light-Shift不帶探針,我們自己合成了生物素標記的NFkB探針。Light-Shift不帶轉運膜,我們需要另外購買尼龍膜。但EMSA的NFkB信號還是很弱,圖譜也與32P標記探針的EMSA不一致。由于Light-Shift沒有給出任何轉錄因子的反應條件,我們把Kit所帶的KCl,NP-40,甘油,MgCl2,EDTA等都測試過,沒有獲得好結果。后來Pierce的技術把自己用的生物素NFkB探針給我們對照,但即使用Pierce的探針,結果也很不理想(我們至今還保留有Pierce的往來郵件)。后來,經過不斷的測試與對比,我們找到了引起非放射性EMSA信號弱和與放射性EMSA結果不一致的問題。但許多生物公司與許多實驗室并不了解這個問題。
(3) 同時期,我們還有幾項有商業價值的革新性技術(查看)
由于WB的應用非常普遍,用化學發光成像儀代替感光膠片可能有好的市場前景。EMSA是測定轉錄因子活性的金指標,具有不可替代性,非放射性EMSA應該有一定的商業價值,加上我們的另外幾項發明與改革,幾位曾經的文章共署名人各自出了部份資金,2005年創立了微奧基因 Biotech。同年年中在寧波保稅區成立唯奧基因中國公司,2006年EMSA試劑盒,化學發光成像儀等產品陸續上市。
二,品牌故事
微奧基因是原創開發公司,在產品與技術開發方面做過以下努力。
(1) 開創自己的品牌與商標。在美國商業環境下,生物公司基本都是自己做銷售,并不經過經銷商的環節。微奧基因要生存就需要有自己的品牌,為此,微奧基因 采用了一系列商品名(一些也在國內注冊);Cool-Imager(化學發光成像儀),Non-Radioactive EMSA (nrEMSA),Lumigel(實時凝膠電泳系統),TransEZ(快速細胞轉染試劑),CoolStar(非EB RNA/DNA染色劑),Lightgen(化學發光底物),Coolblue(藍光透射儀)等。
(2) 產品有自己的特質。如果微奧基因開發的產品以技術與著名大公司雷同就將很難生存。因而,微奧基因的主要產品都有其鮮明的特性,下面為一些主要產品的特性:
1) 時到如今,許多使用Bio-RAD或Alpha Innotech化學發光成像儀的公司,仍然還在使用感光膠片獲取WB圖像,因為成像儀的靈敏度不夠。微奧基因的成像儀有極高的靈敏度,可以完全代替感光膠片。將微奧基因的成像儀(Cool-Imager)與Bio-RAD或Alpha Innotech化學發光成像儀進行現場比較,用同一張膜,Cool-Imager的靈敏度要高很多,可以完全代替感光膠片。實際上,微奧基因所從事的非放射性EMSA與非放射性分子雜交技術服務一直都使用Cool-Imager,從來沒有出現看不到圖的情況。
2)
因為我們本身就是ECL成像儀的生產廠商,能夠輕易對各種ECL產品進行比較,能夠對ECL原料進行篩選,找出靈敏度高與穩定性好的的ECL成分。我們的實驗室一天就能完成幾百樣品的測定與比對。我們測試比較過國內外的許多廠家的ECL產品,包括國外的GE,Pierce,Bio-Rad,Li-Cor,Lumigen,以及國內的碧..天,
San..gon的產品。我們的用于感光膠片ECL底物(LightgenCL)性能與Pierce的Pico與Dura相當,比GE的同等產品強,價格卻只有1/4左右。相對而言,國內一些ECL產品并沒有經過測試比較,所宣稱的ECL靈敏度與穩定性只是傳說。我們曾經把碧..天的ECL底物進行測試,結果慘不忍睹:靈敏度不高,而且與HRP濃度沒有線性關系。我們向有關廠家反應過問題,對方也承認靈敏度問題,我們有來往郵件,歡迎索取。
3) 由于我們創業團隊對EMSA有豐富經驗,能夠準確確定轉錄因子的EMSA結合條件。因而,我們認為沒有必要讓客戶自己摸索測定條件。微奧基因的所有EMSA成套試劑都包括標記探針,反應液,測定液,轉運膜,ECL底物與詳細的操作說明書。試劑的EMSA測定的條件都已經確定,客戶照說明書做就行了, 做出來的圖也非常漂亮。第2圖為我們最近為客戶做的NFkB測定圖譜,其中就一條清楚的NFkB帶,能夠與非標記探針產生明顯競爭(第5-6道),突變探針對該結合帶沒有影響(道7-8)。相比之下,Pierce的圖有一大堆條帶(查看廠家的效果圖),要找出那一條是NFkB并不容易。同樣的,我們開發的近紅外EMSA測定效果(第3圖)比別的廠家也有顯著提高( 查看廠家效果圖)。需要注意的是該廠家的NFkB測定需要使用4-12%梯度膠,而我們的EMSA是在普通6%膠,跑40分鐘就可完成,效果還更好。用微奧基因的產品與技術,能夠做出漂亮的RNA EMSA圖譜(第4圖)。
4) 與用放射性同位素標記探針的EMSA進行比較,我們發現網上列出的EMSA探針序列基本上都是用于32P標記探針的。由于用于非放射性EMSA的生物素標記探針或熒光標記探針與32P標記探針有很大不同,直接將網上找到的放射性探針序列用于非放射性EMSA會引起很大問題(查看),微奧基因有一套對探針進行非放射性標記的技術與程序,我們的標記技術的優勢表現為; 1)EMSA測定信號強,2)結果與放射性EMSA可比性高,3)價格實惠,例如用近紅熒光標記探針的價格,價格僅僅相當于合成公司的1/2-1/3。已標記的生物素價格價格更低至550元(購試劑時的優惠價)。
5) 微奧基因的研發團隊對產品與技術精益求精,產品由最初的5種增加到數百種。測定技術由最初的一類增加到三類。測定時間由最初的7小時可以縮短到2小時左右,操作步驟由原來的10多步操作精簡到2-3步。已標記探針的價格減少了一倍,探針定制由原來2200元一對減少到550元(訂購試劑時的優惠價)。相比之下,Roche與Pierce的EMSA試劑在10年前投放市場,基本沒有什么改進;不管是使用Roche的還是Pierce的產品,都還要求客戶自己標記探針并做比活性測定,與TF的結合條件至今仍然還要客戶自己摸索。
(3) 產品針對性強
1) 微奧基因的產品開發有相當的針對性。開發的動力是為解決在實驗工作中遇到的實際困難:如ECL成像,非EB染色,非放射性EMSA,快速細胞轉染與非放射性分子雜交等。
2) 一些產品是因為客戶反應的問題或普遍存在的問題。我們在開始時并沒有打算開發核蛋白提取試劑。但后來,多次發現客戶提取的核蛋白出現了降解,有幾位開發自己配置試劑時出錯,我們就把我們實驗室長期使用的核蛋白提取的配方做成了產品,因為我們的試劑從來沒有出現過降解問題。后來的事實也證明我們的核蛋白提取試劑確實為客戶帶來方便,甚至一些使用別的公司的產品導致EMSA測定失敗的客戶使用我們的產品后獲得成功。
3) 一些試劑是我們發現市場現有產品有些問題存在。典型的例子是市場上的BCA蛋白濃度測定試劑與EGTA不兼容問題。EGTA是核蛋白提取的重要成分,但會會造成BCA試劑變色,造成蛋白濃度測定虛高。造成EMSA測定無信號或信號弱。
4)
一些產品是因為國內廠家宣稱的產品名不符實,典型的例子是ECL底物。由于市場上ECL比較多,我們開始并沒有打算開發ECL產品。但測試的國內產品效果很不好,最要命的是與HRP濃度不成線性關系,無法用于我們的EMSA測定。我們自主開發的ECL產品已經很好解決了靈敏度與酶線性關系問題,國內外用戶反應良好。重要的是我們提供免費樣品供測試比較。
(4)產品接受客戶與市場檢驗。
微奧基因的自創產品在上市初期,都提供免費樣品或讓用戶免費使用。時至今日,微奧基因的產品贏得了國內外無數客戶的認可;美國客戶包括Eli Lilly公司,BD公司已經許多知名大學與研究院所,國內的客戶包括國內絕大多數的大學與研究院所。2005年推出EMSA試劑與技術服務時,國內技術服務的第一個客戶是廣東湛江醫學院的陶靜莉老師,因為當地干冰不好搞,陶老師是用一個小液氮罐通過陸運寄給我們的。做完實驗后我們再把罐子寄回給她。樣品是大鼠腎臟,結果很漂亮。在產品推出早期,我公司甚至為到我公司進行EMSA實驗客戶提供免費吃、住。先后有哈爾濱醫科大學的胡老師,浙江中醫藥大學的馬老師,北京天壇醫院神內科的薛教授,寧波大學的魏老師,南通大學的徐老師,廈門醫科大學的羅老師等帶組織或細胞到我公司進行做NFKB EMSA測定,都獲得預期的結果。經過多年的耕耘,Vingent公司的產品已被越來越多的客戶所接受。客戶可以在論壇上看到有用Pierce產品或用碧..天產品做不出結果的報道,但沒有微奧基因產品不工作的報道。
我們已經服務過數百個客戶,測定過成千上萬的樣品。到2015年年初,客戶已經發表了200多篇文章。