EMSA方法比較


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微奧基因的基于化學(xué)發(fā)光的非放射性EMSA試劑與技術(shù)服務(wù),已得到越來越多用戶的認(rèn)可。微奧基因公司的科學(xué)家并持續(xù)對產(chǎn)品進(jìn)行改進(jìn)以期提供更多高效、快速、價低的實驗試劑。 在對比各種EMSA測定方法中,我們發(fā)現(xiàn)基于地高辛標(biāo)記法的EMSA測定靈敏度低,操作繁瑣,耗時,我們決定不做與地高辛標(biāo)記有關(guān)的任何產(chǎn)品開發(fā)。另一方面,我們發(fā)現(xiàn)用近紅外熒光分子標(biāo)記的探針做EMSA測定,效果不錯,但存在探針在國內(nèi)不易獲得,探針容易產(chǎn)生聚集等問題。為此,我們開發(fā)了基于近紅外熒光的EMSA試劑,并解決熒光探針標(biāo)記等問題。微奧基因現(xiàn)在能夠?qū)γ恳环N轉(zhuǎn)錄因子的EMSA測定提供三種不同測定方法的試劑供客戶選擇。下表列出每種測定方法的優(yōu)缺點(diǎn)及所需的儀器設(shè)備。在表下面,我們用示意圖解釋了每種測定方法的大致步驟及所需要的時間。請有需要的客戶結(jié)合各自的情況選用適當(dāng)?shù)脑噭腥魏我蓡枺埮c我們聯(lián)系。

 

1. 三種測定方法的比較

  探針直染EMSA 近紅熒光探針EMSA 生物素探針EMSA
產(chǎn)品名 gsEMSA-FK irEMSA-FK biEMSA-FK
目錄號 gs+TF序列號 ir+TF序列號 bi+TF序列號
所需探針 非標(biāo)記探針 近紅熒光標(biāo)記探針 生物素標(biāo)記探針
Poly[dI:dC] 不允許使用 一般都用 一般都用
凝膠電泳時間 1小時左右 1小時左右 1.5小時左右
必需儀器設(shè)備 電泳裝置,成像儀或掃描儀。 電泳裝置,熒光成像儀或掃描儀,推薦美國Li-Cor的近紅外掃描儀。 電泳裝置,DNA紫外交聯(lián)儀,X光膠片沖印設(shè)備或化學(xué)發(fā)光成像儀。
測定靈敏度
所需時間 2小時 2.5小時 5-6小時
DNA染液 需要 - -
核蛋白用量 15-25ug 2-5ug 2-5ug
適用樣品 僅用于純化蛋白 粗制樣品或純化蛋白均可 粗制樣品或純化蛋白均可

 

2. 三種測定方法的原理與主要步驟。

ECL/Biotin EMSA IR (近紅外熒光)EMSA 探針直染EMSA
生物素探針EMSA 近紅熒光探針EMSA 探針直接染色EMSA

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