初次接觸EMSA的人面對市場上各種EMSA試劑可能出現選擇困難。網上也常看到有”如何選擇EMSA試劑盒“的求助。微奧基因從事EMSA產品開發與服務有10年，有豐富經驗，對市場情況非常了解，下面的意見供參考。

【A】選用EMSA試劑盒的一般原則。

1. 產品的成熟程度：產品在市場上有多少時間，有多少人用過。
2. 是否有完整EMSA產品鏈：做EMSA需要各種相關試劑。如果服務商本身都沒有條件做EMSA，可以認定所出售的
     EMSA試劑盒根本沒經過檢驗。
3. 了解公司的技術力量：購貨前可向商家問一些EMSA技術問題。如果商家的知識還沒有客戶懂得多，Forget it !!!
4. 了解用戶滿意度：有多少人用過，滿意度怎么樣。
5. 是否有與產品相關的文章發表：盡管沒有文章并不能證明產品好壞，但有相關文章發表肯定對試劑選擇有加分。
6. 不要混用幾家公司產品：因為 1）不同廠家所用的產品成分各有不同，混合使用很可能不工作。2）會導致難于找出
    EMSA遇到的問題。3）如果結果不理想，都不知道向那家公司求助。

例如，某位客戶所用的樣品是鼠腦組織，EMSA試劑盒是碧云天的，核蛋白提取是Thermo的，探針序列是網上找的，Oligoes是生工合成，雙鏈探針是自己做的，用的是Minipore Hypond膜，做實驗沒有TF對照。該客戶的問題是圖譜只顯示游離探針帶，沒有結合帶。對類似的求助，我們很難提供有效幫助。

【B】發光法EMSA試劑盒比較。市場上天恩澤的“另頁。熒光法EMSA的比較詳見有關介紹。

	LightShift	DIG-EMSA	EMSA kit	CoolShift	CoolShift	完全EMSA
生產廠商	Thermo	Roche	Signosis	微奧基因
結合反應液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
Poly[dI: dC]	＋	＋1	＋	＋	＋	＋
Poly[dA: dT]	－	＋1	－	－	－	－
Poly Lysine	－	＋1	－	－	－	－
抗DIG抗體	－	＋	－	－	－	－
DIG標記Kit	－	＋	－	－	－	－
上樣液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
親和素-HRP	＋	－	＋	＋	＋	＋
發光底物	HRP	AKP	HRP	HRP	HRP	HRP
膜封閉液	＋	＋	＋	＋	＋	＋
膜洗液	＋	－	＋	＋	＋	＋
HRP平衡液	＋	－	＋	＋	＋	＋
生物素探針	－	－	＋	－	＋	＋
專用轉運膜	－	－	＋	－	＋	＋
MgCL2	＋	－	－	－10	－10	－10
KCL8	＋	－	－	－10	－10	－10
NP408	＋	－	－	－10	－10	－10
Glycerol8	＋	－	－	－10	－10	－10
EDTA8	＋	－	－	－10	－10	－10
BSA8	＋	－	－	－10	－10	－10
質控標記探針	＋3	＋4	－	＋5	－	＋5
競爭探針	－	－	－	option	option	＋
突變探針	－	－	－	option	option	＋
質控蛋白	＋6	＋7	－	option	option	option
陰性對照9	－	－	－	option	option	option
陽性對照9	－	－	－	option	option	option
EMSA預制膠	－	－	－	option	option	option
EMSA電泳液	－	－	－	option	option	option
測定樣品數	100	100	30	100	100	30/50
注1. Roche 通過Poly[dI: dC]、Poly[dA: dT]與Poly Lysine的用量來控制DIG EMSA的背景與結合帶強弱。生物素與熒光EMSA通常是通過Poly[dI: dC] 。一些公司還使用額外成分控制EMSA的背景，微奧基因經過 注3-5. Thermo試劑配EBNA探針與EBNA6，Roche配OCT2A探針與OCT2A做試劑質控7，與客戶樣品的測定條件沒有關系。微奧基因的質控探針帶多個看家基因結合位點，能夠與客戶的核提取產生結合帶，除了用作試劑質控，還能直接確定客戶樣品質量。 注9. 微奧基因供應數十種與客戶待測轉錄因子相同的陽性/陰性對照。 注10. 有關成分已經整合到特定轉錄因子的反應液中。測定條件已經確定，不需要客戶再做優化。

 

【C】市場產品點評。

1. 關于Thermo的LightShift試劑盒

優點 -- 1）非放射性，生物素/ECL系統，靈敏度高，2）適用于未知結合條件的測定，3）試劑量大，4）穩定，5）帶EBNF陽性對照*。
缺點 -- 1）價格貴，5000元/套。2）非即用試劑盒；客戶需要制備或另購探針。對首次接觸EMSA的客戶，所制作的探針可能不工作。3）測定條件需摸索。以NFkB為例，用所配“優化劑”做EMSA會出現多種結合帶（右圖），需要時間、錢財與經驗來確定結合帶。用于測定未知TF，會導致判斷困難。4）不帶轉運膜。做EMSA須另購強正電尼龍膜（EMSA不能使用NC與PVDF）。 5）EBNF對照意義不大*（下面解釋）。6）在國內難于獲得有力技術支持。
*注EBNF對照用處不大，因為 1）EBNF分子很小，結合帶在游離探針上面一點，遠離常見的TF結合區，難于用作標準判斷樣品的位置。2）EBNF反應條件與實際樣品非常不同。EMSA失敗一般是由于核蛋白丟失、蛋白降解、蛋白因子未活化、探針不結合或實驗失誤等原因，但與EBNF有無結合關系不大。3）理論上，當電泳、轉膜、紫外交聯、酶反應、洗膜或ECL底物環節出現問題時，EBNF帶會看不到。實際操作中，如果游離探針都看不到本身就提示實驗在前述環節出了問題，沒有非用EBNF的理由。4）再者，用于發文的EMSA圖是不會帶EBNF帶的，需要裁剪掉。

2.  關于Roche地高辛（DIG）標記EMSA試劑盒

優點 -- 1）非放射性，2）適用于未知結合條件的TF測定，3）試劑量大，4）穩定，5）帶OCT2A陽性對照*。
缺點-- 為最早的非放射性EMSA試劑，但與后來開發的生物素/熒光EMSA相比，已沒有任何優勢。1）非即用型試劑盒，到貨后要標記探針，配制膜洗液與購買轉運膜等。2）貴；7000多一套，比任何EMSA試劑盒都貴。 3）工作量大；DIG標記手工進行，標記率低。相比之下，生物素/紅外熒光標記在機器合成核酸時進行，與訂購引物一樣簡單。 4）費時；手工標記探針需要兩天時間。此外、DIG發光檢測是基于半抗原/抗體反應，親和性低，需要2天才能見到結果。而生物素/親和素的結合比抗原/抗體強萬倍，~5小時左右就能出結果。近紅外熒光EMSA更將檢測時間縮短到~2小時。5）背景高；DIG的抗原/抗體反應只能在溫和條件下孵育。相比之下，生物素/親和素結合能經歷嚴苛的孵育與洗滌條件，圖譜更漂亮。 6）靈敏度低；DIG系統使用堿性磷酸酶（AKP）系統（說明書要求曝光15-30分鐘），其靈敏度遠不如HRP（曝光1-5分鐘）。如果使用成像儀，AKP的結果很難看到。 5）國內很難獲得技術支持。

3. 關于Signosis EMSA試劑盒

優點 -- 1）非放射性生物素/ECL系統，靈敏度高。2）帶探針與膜的即用型。
缺點 -- 1）價格貴，4500元/30次測定。2）選擇有限，無法進行個性化或SNP測定。3）國內很難獲得技術支持。

4. 關于碧云天化學發光EMSA試劑盒

優點 -- 1）非放射性，生物素/ECL系統，靈敏度高。2）試劑量大。3）價格低。
缺點 -- 1）非即用型不帶探針。無EMSA經驗的客戶設計、制作的探針很可能不工作（探針問題解釋）。2）不帶轉運膜，使用用于WB的NC、PVDF膜等肯定拿不到好結果。3）所使用反應液單一配方不能對EMSA結果進行任何優化與調整。因為做EMSA實驗時，開始可能看不到或看到很弱的結合帶，需要對實驗條件進行優化才能獲得良好結果。但碧云天EMSA試劑盒不能對測定條件做任何調整。以常見的NFkB（右上圖）與AP-1 （右圖）EMSA為例，相同樣品與探針在不同反應液做EMSA結合反應，所測得的EMSA結果有很大差別。例如，兩圖中的第3泳道使用相同反應液，在AP-1圖中看不到結合帶（右圖最上帶），但在NFkB圖中出現高背景（右上圖最上帶為NFkB帶）。很明顯，使用單一反應液不能調整反應條件，很可能導致失敗、信號弱、或出現無法解釋的結果。把單一反應液用于成千上萬種轉錄因子/結合蛋白測定，會產生很多問題。

各種試劑對轉錄因子結合的影響在 “Molecular Cloning, A Laboratory Manual” 有詳細介紹。實際操作中，不管是我們提供的EMSA技術服務還是客戶自己做測定，差不多每種轉錄因子的EMSA測定都需優化條件才能成功。

5. 關于微奧基因 EMSA試劑盒

微奧基因 不像Thermo、Roche、Li Cor 甚至 碧云天那樣有名。但我們聚焦于轉錄因子活性檢測這一領域，所提供的相關產品類別最全、數量最多（產品列表）。產品線涵蓋了測定未知反應條件蛋白因子的通用型以及針對特定轉錄因子測定的即用型成套試劑（比較上面表格）。微奧基因的EMSA試劑盒對所測定的TF已經預實驗確定了測定條件，成功率高，價格有競爭性。地表上沒有哪家公司能夠提供如此種類繁多的陽性轉錄因子對照，以及種類繁多的近紅外熒光EMSA產品。

從測定靈敏度與易于操作考慮，微奧基因的EMSA產品沒有包括基于DIG標記的測定系統。微奧基因不會提供單一反應液的EMSA產品。一是所有轉錄因子與DNA的結合都在相同化學成分、相同離子條件、相同pH條件下從來未見報道，相反大量文獻以及我們的實驗證實轉錄因子與DNA的結合在不同反應液中有明顯差別。實際上，我們也是協助客戶調整實驗條件與反應液成分而幫助客戶取得成功的。

微奧基因 提供各種轉錄因子活性檢測的技術服務（服務列表），使用我們產品與服務而發表文章有上千篇。

我們的技術支持一流，QQ:2941312161與微信:微奧基因 24小時開放。記憶中，我們還沒遇到解決不了的EMSA問題。

【D】EMSA相關產品的選購（詳情）