初次接觸EMSA的人面對市場上各種EMSA試劑可能出現選擇困難。網上也常看到有”如何選擇EMSA試劑盒“的求助。微奧基因從事EMSA產品開發與服務多年,對產品與市場情況非常了解,下面的意見供參考。考。
【A】選用熒光EMSA試劑盒的一般原則。
1. 產品的成熟程度:產品在市場上有多少時間,有多少人用過。
2. 是否有完整EMSA產品鏈:做EMSA需要各種相關試劑。如果服務商本身都沒有條件做EMSA,可以認定所出售的
EMSA試劑盒根本沒經過檢驗。
3. 了解公司的技術力量:購貨前可向商家問一些EMSA技術問題。如果商家的知識還沒有客戶懂得多,Forget
it !!!
4. 了解用戶滿意度:有多少人用過,滿意度怎么樣。
5.
是否有與產品相關的文章發表:盡管沒有文章并不能證明產品好壞,但有相關文章發表肯定對試劑選擇有利。
6. 不要混用幾家公司產品:因為 1)不同廠家所用的產品成分各有不同,混合使用很可能不工作。2)會導致難于找出
EMSA遇到的問題。3)如果結果不理想,都不知道向那家公司求助。
【B】熒光法EMSA試劑盒產品比較。不同EMSA測定技術比較見另頁。化學發光法EMSA詳見有關介紹。
EMSA-SYBR
IRDye EMSA
CoolShift-ird
完全熒光EMSA
完全熒光EMSA+
生產廠商
Thermo1
Li Cor2
微奧基因
標記物
-
IRDye700
-
TYE705
TYE705
結合反應液
+
+
+
+
+
Poly[dI: dC]
+
+
+
+
+
魚精蛋白
-
+
-
-
-
DTT
-
+
-
-
-
Tween20
-
+
-
-
-
Enhancer
-
-
+
+
+
上樣液
+
+
+
+
+
熒光標記探針
-
-
-
+
+
SYBR染液
+
-
-
-
-
膠固定液
+
-
-
-
-
蛋白染液
+4
-
-
-
-
MgCL2
-
+
+
-5
-5
KCL
-
+
+
-5
-5
NP40
-
+
+
-5
-5
Glycero
-
+
+
-5
-5
EDTA
-
+
+
-5
-5
BSA
-
-
+
-5
-5
可選熒光探針
-
7種
上百種
上百種
上百種
質控標記探針
-
-
+3
-
+3
競爭探針
-
-
option
option
+
突變探針
-
-
option
option
+
質控蛋白
-
-
option
option
option
陰性對照4
-
-
option
option
option
陽性對照4
-
-
option
option
option
EMSA預制膠
-
-
option
option
option
EMSA電泳液
-
-
option
option
option
測定樣品數
10片膠
100
100
30/50
30/50
價格
~1500
~2500
1450
1995/2895
2442/3395
注1.
EMSA-SYBR試劑盒是通過染非標記DNA探針顯示結果,價格便宜。但不適合大多數客戶,
因為
;1)靈敏度低,需要使用比標記探針多10-20倍的探針與樣品。2)由于測定中不能使用Poly[dI:dC],用于樣品測試會出現高背景。3)比較適合于純化蛋白樣品的EMSA測定。3)所配的蛋白染色熒光試劑意義不大:EMSA膠中有蛋白染色帶無法推斷轉錄因子是否激活,不做蛋白染色對文章發表沒有影響。實際上,EMSA測定基本都不做蛋白染色。
注2.
Li Cor 的近紅外熒光EMSA 具有靈敏度高,快速出結果的優點。但 1)價格比較貴
- 標記探針 700元/25次
。2)只有7種配套近紅外熒光探針,探針選擇有限。3)國內基本不能獲得有效技術支持。
注3. 微奧基因的質控探針帶多個看家基因啟動子結合位點,能夠與客戶的核提取產生結合帶,除了用作試劑質控,還能直接確定客戶樣品質量。客戶也可以向我們購買質控蛋白。
注4.
微奧基因供應數十種與客戶待測轉錄因子相同的陽性/陰性對照。
注5.
有關成分已經整合到特定轉錄因子的反應液中。測定條件已經確定,不需要客戶再做優化。
【C】微奧基因 熒光EMSA產品與服務
微奧基因 提供品類最多的近紅外熒光EMSA產品(產品列表)與各種轉錄因子活性檢測的技術服務(服務列表),使用我們產品和服務的客戶已發表上千篇文章。我們的技術支持一流,QQ:2941312161與微信:微奧基因 24小時開放。記憶中,我們還沒有遇到解決不了的EMSA問題。
【D】EMSA相關產品的選購(詳情)